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华南农业大学徐振林团队‖【JAFC】超灵敏时间分辨荧光免疫层析法:一种甲苯咪唑快速检测新策略

2026-02-12 11:40:57

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介绍 /Introduction

甲苯咪唑（MBZ）是一种广谱的苯并咪唑类驱虫药，广泛应用于兽医领域和水产养殖业。然而，其在动物源性食品中的潜在残留问题引发了越来越多的关注。在本研究中，华南农业大学徐振林团队通过使用一种新设计的含有羧基间隔基团的苯并咪唑环 N1 位点的半抗原，成功制备了一种高亲和力和特异性的单克隆抗体（mAb）。所获得的 mAb 的 IC50 值为 0.13 纳克/毫升，且对相关化合物的交叉反应性极低。将这种 mAb 与时间分辨荧光微球相结合，开发了一种时间分辨荧光免疫层析检测法（TRFIA），用于快速定量检测甲苯咪唑。该 TRFIA 在强化羊肉和鲤鱼样本中实现了 1.02 微克/千克的检测限，回收率在 83.5%至 114.5%之间，变异系数低于 10.8%。结果与 LC−MS/MS 的相关性极强（R2 > 0.97）。这种 TRFIA 提供了一个高度灵敏、可靠且经济高效的平台，用于现场筛查动物源性食品中的甲苯咪唑残留。

研究图文/Introduction

Figure 1. Schematic illustration of TRFIA for MBZ detection.

Figure 2. Synthetic route of hapten MBZ-H1 and MBZ-H2.

Figure 3. Computational chemistry parameters of MBZ, haptens MBZ-H1 and MBZ-H2 (A); distribution and gaps (ΔE) of the HOMO and LUMO for MBZ, haptens MBZ-H1 and MBZ-H2 (B); ESP surfaces of MBZ, haptens MBZ-H1 and MBZ-H2; (C) Mulliken charge distribution of MBZ, haptens MBZ-H1 and MBZ-H2. Only those atoms that are shared by these structures are displayed. Hydrogen atoms are not included.

Figure 4. Characterization of the monoclonal antibody (mAb) and TRFM-mAb conjugate. (A) The subtype of the mAb (the inset picture is the prepared hybridoma cell lines under microscopy); (B) the ic-ELISA inhibition curve of the anti-MBZ mAb against MBZ; (C) TEM of TRFM; (D) Zeta potential of TRFM and TRFM-mAb.

Figure 5. Performance of TRFIA. (A) The standard curve of MBZ detection by TRFIA, (B) the specificity of TRFIA for detection of MBZ. (a-i: Mebendazole; 2-amino-5-benzoyl-benzimidazole; 5-hydroxymebendazole; Albendazole; Albendazole; Sulfone; Albendazole sulfoxide; Oxfendazole; Flubendazole; Carbendazim); (C) the stability of TRFIA; (D) Comparison the results of LC/MS/MS with those of TRFIA.

结论 /Conclusion

总之，我们成功开发了一种高度灵敏且特异的基于单克隆抗体（mAb）的时域荧光免疫层析检测法（TRFIA），用于快速检测动物源性食品中的甲苯咪唑（MBZ）残留。我们合成了一种带有羧基间隔臂（位于苯并咪唑环的 N1 位置）的新型半抗原，从而能够制备出具有低亲和力（IC50 为 0.13 ng/mL）且对结构相关化合物无交叉反应的高亲和力单克隆抗体。所建立的 TRFIA 采用时域荧光微球作为信号报告器，实现了实际检测限为 1.02 μg/kg 的效果，并在掺入甲鱼和鲤鱼样本中显示出高回收率（83.5 - 114.5%）和低变异系数（<10.8%）。结果表明，该方法与 LC-MS/MS 具有极好的相关性（R2 > 0.97），证实了该检测方法的准确性和可靠性。与传统的 ELISA 和 GICA 方法相比，这种 TRFIA 提供了快速、经济且定量的检测能力，使其非常适合大规模、现场筛查。总体而言，该方法为加强甲苯咪唑残留监测和保障牲畜和水产产品食品安全提供了可靠的工具。

文献信息 /Literature information

Development of an Ultrasensitive Monoclonal Antibody-Based Time-Resolved Fluorescence Immunochromatographic Assay for Mebendazole DetectionZhan-Peng Chen,⊥ Jie Liu,⊥ Lin Luo,* Bao-Zhu Jia, Bin Lu,* Wenwen Wang, Peiqiang Shuai, and Zhen-Lin Xu*原文链接：https://doi.org/10.1021/acs.jafc.5c07301