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吉林农业大学-抗炎、抗氧化和抗衰老的鹿茸活性肽

  • 2026-05-14 05:40:46
吉林农业大学-抗炎、抗氧化和抗衰老的鹿茸活性肽
1.专利号：CN121736067A，专利名称：一种鹿茸活性肽及其在抗炎、抗氧化和抗衰老中的应用，申请日：2025.12.30，公布（开）日：2026.03.27，申请人：吉林农业大学
本发明利用从鹿茸中首次筛选出的全新活性肽 SPLASDLDL，通过其与TNFR1受体特异性结合的特 征，实现了对TNFR1的竞争性抑制。通过构建的睾丸支持细胞衰老模型证实了该多肽具有抗炎、抗氧化和抗衰老作用。本发明成功地解决了现有技术未能从鹿茸中发现竞争抑制TNFR1靶向肽并阐 明其作用机制的技术问题，为开发源于天然产物的新型抗炎和抗衰药物提供了作用机理和科学依据。
1.1权利要求保护范围
1.2相关试验测试
1.2.1合成肽和TNF‑α的竞争检测结果
结果显示，随着PT和SP浓度的升高，TNF‑α与TNFR1的结合响应信号呈浓度依赖性 降低；SPR结合曲线（图7和图9）显示，PT与TNFR1的解离常数为5.1 μM，SP与TNFR1解离常数 为3.1 μM。在生物分子相互作用中，KD（解离常数）的数值越小，代表分子间结合越紧密、亲 和力越强，因此SP的竞争结合能力强于PT。动力学曲线（图8和图10）进一步呈现了不同浓度 肽段与TNFR1的结合和解离过程，响应信号随肽浓度升高而增强。随着合成肽SP浓度的增 加，TNF‑α与TNFR1的结合反应显著降低，呈负相关。当合成肽SP浓度达到200 μM（IC50 ）时，它 对TNF‑α与TNFR1的结合产生一半抑制，提示该肽具备TNFR1靶向拮抗活性。
1.2.2多肽改善D‑半乳糖诱导的睾丸支持细胞（TM4）损伤的作用机制
在D‑gal诱导的TM4细胞衰老的模型中，采用CCK‑8法检测细胞活力以评估SP的保 护作用。如图11所示，与Control组相比，16.125‑1000 μg/mL的SP处理对TM4细胞的细胞没 有毒性。如图12所示，与模型组相比，不同浓度SP均对D‑gal诱导的TM4细胞活力下降有改善 作用，且呈剂量依赖性。最终选择125、250、500μg/mL SP作为低中高剂量组进行下一步实 验。
1.2.3多肽对D‑gal诱导的TM4细胞紧密连接蛋白（ZO‑1）的影响
ZO‑1是维持屏障完整的关键紧密连接蛋白。通过免疫荧光染色观察ZO‑1在TM4细 胞中的表达和分布。如图13所示，Control组ZO‑1表达正常，主要沿细胞膜连续分布，呈现清 晰、完整的网状结构。D‑gal处理导致ZO‑1表达显著减少和分布紊乱，表现为荧光信号减弱、 连续性中断和结构模糊，提示紧密连接受损。与模型组相比，给药组均能不同程度改善ZO‑1 的表达与定位。其中，高浓度SP处理组ZO‑1荧光信号最强，且呈浓度依赖性增强。这些结果 证明，SP能够上调ZO‑1表达并促进其正确分布，从而保护TM4细胞的紧密连接完整性。
1.2.4多肽对D‑gal诱导的TM4细胞的炎症因子和抗氧化能力的影响
TNF‑α是反映炎症反应程度的核心指标。结果显示，与Control组相比，模型组TNF α显著升高；与D‑gal组相比，阳性药处理组（D‑gal+VE）、D‑gal+TNF组的TNF‑α水平均显著降 低（****，P<0.0001），而D‑gal+SP各剂量组（高、中、低）的TNF‑α水平呈剂量依赖性下降，SP 可抑制TNF‑α，有效缓解D‑gal诱导的炎症反应（图14）。
MDA是脂质过氧化的特征性产物，其水平直接反映氧化损伤程度。结果显示，与 Control组相比，模型组MDA水平极显著升高，提示模型组发生严重的脂质过氧化损伤；与D gal组相比，D‑gal+VE组、D‑gal+TNF组的MDA水平降低，D‑gal+SP高剂量组MDA水平显著下 降，说明SP可减轻D‑gal诱导的氧化损伤（图15）。
SOD是清除超氧阴离子的关键抗氧化酶，其活性反映机体基础抗氧化能力。结果显 示，与Control组相比，D‑gal组SOD活性显著降低，提示模型组抗氧化系统功能受损；与D gal组相比，D‑gal+VE组、D‑gal+TNF组的SOD活性回升，D‑gal+SP高剂量组SOD活性显著升 高，表明SP可改善D‑gal诱导的SOD活性抑制（图16）。
GSH‑Px参与清除细胞内过氧化物，是抗氧化系统的重要组分。结果显示，与 Control组相比，D‑gal组GSH‑Px活性显著降低，提示模型组过氧化物清除能力下降；与D gal组相比，D‑gal+VE组GSH‑Px活性回升，D‑gal+SP高剂量组的GSH‑Px活性显著升高，中、低 剂量组呈不同程度的活性恢复。这一结果表明，SP可改善D‑gal诱导的氧化损伤（图17）。 
CAT负责催化过氧化氢分解，其活性反映机体对活性氧的清除能力。结果显示，与 Control组相比，D‑gal组CAT活性显著降低，提示模型组过氧化氢清除能力下降；与D‑gal组 相比，D‑gal+VE组、D‑gal+TNF组的CAT活性显著回升（****，P<0.0001），D‑gal+SP高剂量组 CAT活性升高。这一结果表明，SP可增强D‑gal诱导的TM4的抗氧化活性（图18）。
1.2.5TM4细胞对多肽的摄取情况
SP偶联FITC荧光标记物（SP‑FITC）的细胞摄取荧光成像实验结果如图19所示。0h 时，视野呈深暗绿色，几乎无明显荧光信号，说明此时细胞摄取量极微。2h时，荧光信号逐渐 增强，细胞内可观察到更清晰的荧光斑点；8h时，荧光信号达到各时间点中的最强水平，细 胞区域的绿色荧光更密集、明亮，说明随着孵育时间延长，荧光信号越强，细胞对SP‑FITC的 摄取量呈时间依赖性持续上升。
1.2.6多肽对D‑gal诱导的TM4细胞中mRNA表达的影响
采用RT‑qPCR检测TNF‑α/p38MAPK通路关键分子（c‑JUN、JNK、p38、TNF‑α）及细胞连 接蛋白ZO‑1的mRNA表达（GAPDH为内参）：与Control组相比，D‑gal组c‑JUN、JNK、p38、TNF‑α 显著上调（P<0.001），ZO‑1mRNA表达水平显著下调（P<0.001），提示D‑gal激活TNF‑α/ p38MAPK通路并抑制细胞连接相关转录；与D‑gal组相比，D‑gal+SP各剂量组可剂量依赖性 下调c‑JUN、JNK、p38、TNF‑α的mRNA表达水平（P<0.05），同时上调ZO‑1水平（P<0.05）。结果表 明，SP可以抑制TNF‑α，改善D‑gal诱导的TM4炎症损伤和细胞连接表达（图20‑图24）。
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