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吉林农业大学-预防炎症的小分子肽

  • 2026-05-17 07:15:47
吉林农业大学-预防炎症的小分子肽
1.专利号：CN121673366A，专利名称：小分子肽及应用，申请日：2026.02.10，公布（开）日：2026.03.17，申请人：吉林农业大学
本发明公开了小分子肽及应用，涉及医药化学技术领域，旨在克服现有技术安全性低、可靠性不足的缺陷，所述小分子肽的氨基酸序列如 SEQ ID NO:1所示。本发明为炎症的预防、缓解及治疗提供了安全高效的新选择。
1.1权利要求保护范围
1.2相关试验测试
1.2.1：PYYFH多肽对RAW264.7细胞炎症的保护作用
细胞毒性图（图11）显示，50‑1200μg/mL PYYFH处理组细胞存活率为101.82% 107.06%，与Control组（100%）相比无显著差异（P>0.05），而1600μg/mL及以上浓度组细胞存 活率略有下降，表明25‑1200μg/mL浓度范围的PYYFH对RAW264.7细胞无毒性作用。LPS损伤 时间图（图5）中，随着培养时间延长，细胞内NO含量逐渐升高，24h时Model组NO含量达到峰 值，显著高于8、12、16、20h时间点（P<0.01），证实24h为LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型的最 佳损伤时间。ROS荧光图（图7）中，Control组绿色荧光强度最弱，Model组荧光强度显著增 强，PYYFH低、中、高剂量组荧光强度依次降低，呈浓度依赖性下降趋势。SOD活性（图8）和CAT 活性图（图3）中，Model组SOD活性和CAT活性显著低于Control组（P<0.01），PYYFH各剂量组 SOD和CAT活性均明显回升，高剂量组SOD活性和CAT活性接近Control组水平（P>0.05）。NO及 炎症因子图（图4、图6、图9、图10）中，Model组NO、IL‑α、IL‑1β、IL‑6含量显著高于Control组 （P<0.01），PYYFH各剂量组上述指标均呈浓度依赖性降低，高剂量组与Model组相比差异显 著（P<0.01）。
 PYYFH在25‑1200μg/mL浓度范围内对RAW264.7细胞无明显毒性，生物相容性良好。 在LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型中，PYYFH可通过浓度依赖性降低细胞内ROS积累，减轻 氧化应激损伤；同时显著提高SOD和CAT等抗氧化酶活性，增强细胞抗氧化能力，抵御LPS引 发的氧化应激反应。此外，PYYFH能有效抑制NO的过量产生，减少IL‑α、IL‑1β、IL‑6等促炎细 胞因子的释放，从氧化应激调控和炎症因子抑制两个关键环节，阻断LPS诱导的炎症级联反 应，发挥显著的细胞炎症保护作用，且这种保护作用具有明显的浓度依赖性，高剂量组干预 效果最优。
1.2.2：免疫荧光共定位探究PYYFH对RAW264.7炎症的影响
激光共聚焦成像图（图12）中，DAPI染色的蓝色荧光清晰标记细胞核位置，Alexa Fluor 594标记的红色荧光代表p65蛋白的表达及定位。Control组中，红色荧光强度较弱， 且主要分布在细胞质中，细胞核内红色荧光极少，表明正常状态下p65蛋白多处于细胞质 中，NF‑κB通路未被激活。Model组中，红色荧光强度显著增强，且红色荧光与蓝色荧光重叠 度极高，细胞核内红色荧光密集，提示LPS刺激后p65蛋白发生核移位，NF‑κB通路被激活。 PYYFH低剂量组细胞核内红色荧光强度有所减弱，中剂量组进一步降低，高剂量组红色荧光 强度最弱，且细胞核内红色荧光分布稀疏，与Control组接近，表明随着PYYFH浓度升高，p65 蛋白的核表达量呈浓度依赖性减少，p65核移位受到显著抑制。此外，Merge图中红色荧光与 蓝色荧光的重叠区域面积也随PYYFH浓度升高而逐渐缩小，进一步证实PYYFH对p65核移位 的抑制作用。
LPS刺激可诱导RAW264.7细胞内NF‑κB p65蛋白发生核移位，激活NF‑κB信号通路， 进而启动炎症相关基因的转录表达，引发炎症反应。PYYFH能够浓度依赖性抑制LPS诱导的 p65蛋白核表达及核移位，减少p65蛋白在细胞核内的积累，从而阻断NF‑κB信号通路的激 活，抑制下游炎症因子的转录合成，最终改善LPS诱导的RAW264.7细胞炎症状态。其中，800μ g/mL PYYFH对p65核移位的抑制效果最显著，与Control组无明显差异，表明该浓度下PYYFH 可有效阻断NF‑κB通路的激活，为其抗炎作用提供了重要的分子机制支撑。
1.2.3：Western Blot探究PYYFH对RAW264.7细胞炎症中NF‑κB和MAPK信号通路蛋白的影响
蛋白条带图像（图13）显示，β‑Actin条带在各组中亮度均匀一致，表明蛋白上样量 均衡，实验结果可靠。NF‑κB信号通路相关蛋白条带中，Model组IκBα、p‑IκBα、p65蛋白（核因 子κB抑制蛋白α、磷酸化核因子κB抑制蛋白α、核因子κBp65亚基）条带亮度显著高于Control 组；PYYFH各剂量干预组上述蛋白条带亮度随浓度升高逐渐减弱，与Model组相比蛋白表达 量明显降低（P>0.05）。MAPK信号通路相关蛋白条带中，Model组p‑p38、p‑JNK、p‑ERK蛋白（磷 酸化p38蛋白、磷酸化JNK蛋白、磷酸化ERK蛋白）条带亮度显著高于Control组，而总p38、 JNK、ERK蛋白条带亮度在各组间无明显差异（P>0.05）；PYYFH各剂量组p‑p38、p‑JNK、p‑ERK 蛋白条带亮度随浓度升高逐渐减弱，高剂量组与Model组相比差异显著（P<0.01），总蛋白表 达量仍无显著变化，表明PYYFH主要抑制MAPK通路关键蛋白的磷酸化激活，而非影响总蛋白 的合成。
 LPS刺激可显著激活RAW264.7细胞的NF‑κB和MAPK信号通路，表现为NF‑κB通路中I κBα、p‑IκBα、p65蛋白表达上调，MAPK通路中p38、JNK、ERK蛋白磷酸化水平升高。PYYFH通过 浓度依赖性降低IκBα、p‑IκBα和p65蛋白的表达，抑制NF‑κB信号通路的激活，减少炎症相关 基因的转录；同时，PYYFH可特异性抑制p38、JNK、ERK蛋白的磷酸化过程，阻断MAPK信号通路 的传导，进而抑制下游促炎因子的产生。此外，PYYFH对MAPK通路总蛋白表达无影响，表明其 作用靶点为蛋白的磷酸化修饰环节，具有较高的特异性。综上，PYYFH可通过协同调控NF‑κB 和MAPK两条关键炎症信号通路，发挥显著的抗炎作用。
1.2.4：UPLC‑Q/TOF‑MS对LPS损伤的RAW264.7细胞进行非靶向代谢组学
如图14（A）可以看出sn Glycerol 3‑phosphate在模型组中上调，表明LPS可能通过调控sn‑Glycerol3‑phosphate 诱导炎症。
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