高血压是一种常见的慢性心血管疾病,主要特征为动脉收缩压或舒张压升高。世界卫生组织统计数据显示,全球约有14亿成年高血压患者,但仅少数患者的病情得到有效控制。人体血压主要受肾素-血管紧张素系统(RAS)和激肽释放酶-激肽系统(KKS)两大体系调控,而血管紧张素转化酶(ACE)在两大调控系统中均发挥关键作用,因此抑制ACE活性已成为高血压治疗的重要思路。目前,卡托普利、依那普利等人工合成ACE抑制剂已实现商业化应用,但这类降压药存在诸多副作用,例如咳嗽、味觉障碍、肾功能损伤、血管性水肿等。上述不良反应促使科研人员研发副作用更低、甚至无副作用的新型降压物质。
近年来,食物源生物活性肽因毒性低得到广泛研究。豆粕是大豆榨油后的副产物,其蛋白质含量高、氨基酸组成稳定,同时含有可发酵碳水化合物。现阶段针对豆粕的研究多集中于饲料加工、抗营养因子脱除等方向,关于豆粕功能性蛋白分离纯化的研究仍较少。
酶解、微生物发酵是制备大豆源功能性多肽的主流生物方法。酶解法利用特异性蛋白酶催化肽键水解,生成小分子多肽,是制备ACE抑制肽的常用手段。但单一酶解工艺存在明显缺陷:产物通常带有浓重苦味,且小分子肽占比偏低,不利于后续产品开发。乳酸菌发酵则可显著改善豆制品风味。乳酸菌依靠自身复杂的酶系,能够分解豆类中的醛类等不良风味物质,将其转化为风味宜人的组分。利用植物乳杆菌发酵豆浆,可生成双乙酰、乙酰乙烯等挥发性风味物质,降解豆腥味成分,提升产品适口性。但仅依靠微生物发酵,大豆多肽的产率往往偏低。因此,开发安全、高效的复合发酵工艺具备广阔应用前景与研究价值。益生菌+外源酶协同分步发酵结合了酶解的高特异性与微生物发酵的强生物转化能力,既能改善产品风味,又能提升体系水解效率,实现高活性ACE抑制肽的定向高效释放,整体效果优于单一酶解或单一发酵工艺。
基于此,该研究采用蛋白酶-乳酸菌分步发酵技术处理豆粕;借助液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)鉴定多肽氨基酸序列;结合计算机筛选与分子对接技术筛选最优活性ACE抑制肽,并探究其作用机制;人工合成目标多肽后评价其体外ACE抑制活性;同时以EA.Hy926内皮细胞为模型,结合实时荧光定量PCR技术,探究豆粕多肽对ACE的潜在抑制机理。