研究团队利用江西东乡普通野生稻与栽培稻材料T5构建的渗入系, 定位并克隆了同时控制水稻株高和穗粒数的主效QTL GNH1。遗传转化验证表明, GNH1功能增强可显著提高水稻株高、二次枝梗数、主茎穗粒数及单株产量, 而GNH1表达下调或功能缺失则导致株高降低、穗粒数减少和产量下降。进一步研究发现, GNH1编码一个定位于内质网的色氨酸氨基转移酶, 参与局部生长素生物合成, 其与此前报道的OsTAR2为同一基因, 表明GNH1通过调控局部生长素水平影响水稻株型和产量形成 (图1)。图1 GNH1基因的转基因功能验证
进一步研究发现, T5与渗入系TDIL17之间GNH1编码区仅存在同义突变, 但GNH1表达水平存在显著差异。作者鉴定出GNH1启动子上游−382 bp处的关键自然变异位点, 该变异能够影响C2H2型锌指转录因子ZFP36的结合能力。酵母单杂交, EMSA和水稻原生质体瞬时表达等实验表明, ZFP36对TDIL17中的GNH1启动子结合能力更强, 并抑制GNH1转录活性; 而T5启动子中的自然变异可削弱ZFP36的结合和抑制作用, 从而提高T5中GNH1的表达水平, 促进局部生长素合成, 最终增加水稻株高、穗粒数和单株产量 (图2)。
图2 ZFP36直接结合GNH1启动子区的功能位点并抑制其表达
通过对水稻种质资源进行单倍型分析, 研究人员发现, GNH1启动子功能位点 (GNH1FNP) 在野生稻中具有较高的遗传多样性, 而在栽培稻中仅保留少数变异类型。其中, GNH1FNP-T5单倍型具有较高的GNH1表达水平和更多的主茎穗粒数, 被认为是具有增产潜力的优异单倍型。进一步在携带GNH1FNP-TDIL17单倍型的粳稻品种中花11和吉粳88中过表达GNH1, 结果表明, 过表达株系的二次枝梗数、主茎穗粒数和单株产量均显著提高, 且未对单株穗数、结实率和抽穗期等重要农艺性状产生不利影响 (图3)。图3 GNH1在水稻育种中的应用潜力