IF=9.8,四川农业大学刘臣讲师团队发文:不同成熟阶段的刺叶栎叶片超声萃取及生物活性黄酮类物质分析

图1 图文摘要

图2 A. spinulosa 叶片在三个成熟阶段（S1-S3）经超声处理前后形态、颜色特征及扫描电子显微镜（SEM）微观结构。（A）代表性植株图像。（B）S1-S3阶段的代表性叶片（上）及相应的干燥粉末（下）。比例尺 = 4 cm。(C) S2和S3相对于S1的粉末颜色差异，以ΔL*、Δa*和Δb*表示。(D) 经20,000倍和50,000倍放大倍率观察的S1-S3粉末在超声处理前后的SEM图像。

图3响应面图和等值线图，显示了超声辅助萃取（UAE）各变量对A. spinulosa 叶片中总黄酮含量的交互作用。（A, a）超声时间和超声功率。（B, b）液固比和超声时间。(C, c) 乙醇浓度与液固比。(D, d) 液固比与超声功率。(E, e) 乙醇浓度与超声功率。(F, f) 乙醇浓度与液固比。

图4 A. spinulosa 不同成熟阶段（S1-S3）叶片中总黄酮提取物的理化特性及储存稳定性。（A）傅里叶变换红外光谱。（B）X射线衍射图谱。（C-E）分别来自S1、S2和S3的提取物的热重（TG）和差热（DTG）曲线。(F-H) S1、S2和S3样本黄酮溶液在光照和避光条件下的光稳定性。(I-K) S1、S2和S3样本黄酮溶液在避光条件下4℃和25℃时的温度稳定性。(L) 黄酮溶液在pH 1–13条件下孵育1小时后的pH稳定性。

图5 基于UPLC-MS/MS技术对A. spinulosa叶片三个成熟阶段（S1-S3）进行的靶向黄酮类代谢组学分析。（A）总离子色谱图。（B）质控样本和生物样本中代谢物的累积变异系数（CV）分布。（C-E）S1、S2和S3阶段中已注释代谢物的化学类别组成。(F) S1-S3阶段总黄酮代谢组含量。(G) 主成分分析（PCA）得分图。(H) 代表性高丰度代谢物的浓度。(I) 代谢物丰度的层次聚类热图。

图6  A. spinulosa 叶片三个成熟阶段间差异黄酮代谢物的 OPLS-DA 分析与聚类分析。(A) OPLS-DA 得分图。(B) 模型稳健性的置换检验。(C-E) S1、S2 和 S3 中差异代谢物的化学类别分布。(F) 差异代谢物的层次聚类热图。

图7  A. spinulosa 黄酮类提取物对 LPS 刺激的 RAW 264.7 巨噬细胞存活率、形态及基因表达的影响。(A) 经 25、50 和 100 μg/mL 黄酮类提取物处理后的细胞存活率。(B) 对照组、LPS组及LPS+S1-S3组的代表性细胞图像。(C-I) IL-1、IL-6、TGF-β、HO-1、NQO1、GPX4和SOD2的相对mRNA表达水平。

图8  A. spinulosa叶片中代表性黄酮类化合物与Keap1和NF-κB的分子对接。（A）槐花苷、西博尔丁和阿皮原花青素-4′-O-葡萄糖苷与Keap1的对接相互作用。（B）烟草花素、槐花苷和西博尔丁与NF-κB的对接相互作用。(C) 与Keap1对接的结合自由能。(D) 与NF-κB对接的结合自由能。

图9 A. spinulosa 叶片中代表性黄酮代谢物对 LPS 刺激的 RAW 264.7 巨噬细胞的细胞存活率、形态及基因表达的影响。(A, B) 经50 μg/mL黄酮代谢物（1–6）处理后的细胞存活率。(C) 对照组、LPS组及LPS+1–6组的代表性细胞图像。(D-O) IL-1β、IL-6、TGF-α、NFKB1、IL-10、TGF-β、KEAP1、NQO1、SOD2、GPX4、HO-1及NRF2的相对mRNA表达水平。数据以均值±标准差表示（n=3）。