摘要:烟草根黑腐病是一种由 Berkeleyomyces basicola 侵染引起的重要烟草根茎病害,常与镰刀菌根腐病和烟草黑胫病混合发生,难以区分,严重威胁我国多个烟区的烟草种植。为实现对烟草根黑腐病的早期、精准和便捷鉴定,本研究基于 B. basicola 的多拷贝特异序列,结合重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)技术与免疫胶体金侧流层析试纸条(Lateral Flow Dipstick,LFD),建立了一种针对该病原菌的高灵敏、高特异性检测方法。该方法无需复杂设备,可实现便捷的可视化检测。结果表明:引物组合 RPA-F1/RPA-R1 的 RPA 扩增效果最佳。基于此建立的 RPA-LFD 检测方法对烟草常见病原菌无交叉反应,适用温度范围宽(32~42 ℃),对 B. basicola 基因组 DNA 的检测灵敏度高达 1 pg,该方法对人工接种样本的检出率为 100%。此外,结合 PEG-NaOH 法快速提取 DNA,可在野外仅依靠体温加热,于 35 min内完成无需专业设备的可视化检测。综上所述,本研究为基层人员在田间开展烟草根黑腐病的快速诊断提供了一种灵敏、准确且便捷的可视化方法。
关键词:烟草根黑腐病;可视化检测;重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条;基腐伯克氏菌
通信作者:樊光进(1987—),男,博士,贵州大学烟草学院副教授,主要从事植物免疫和植物病害防治方面的研究。
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