点击上方"河南农业大学学报"↑关注我们吧《河南农业大学学报》2026年第60卷第1期刊载了河南农业大学机电工程学院/河南省农业激光技术国际联合实验室张燕燕、李林泽、霍培杰、胡建东,郑州海关技术中心朱明明、张守杰的综述文章——“表面增强拉曼光谱检测食源性霉菌毒素的研究进展”。该研究由国家自然科学基金项目(31671581)、中华人民共和国海关总署项目(2023HK128)、河南省科技攻关项目(252102320259)资助。责任编辑邵龙。
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霉菌毒素是真菌或霉菌产生的有毒代谢物,可能通过受污染的谷类食品对人体和动物健康造成严重危害。开发对霉菌毒素快速准确的检测方法发展具有越来越重要的意义。基于表面增强拉曼光谱(SERS)的生物传感技术利用拉曼光谱和纳米技术的结合,为低水平的目标分析物提供独特的化学指纹,目前已经发展成为一种快速、灵敏检测各种食品污染物的强大分析技术,这使得食品安全工作者在非常低的浓度下检测目标霉菌毒素分析物成为可能。因此,对SERS技术在食源性霉菌毒素检测研究中的应用进行全面阐述,以帮助提高sers在未来现场农业食品应用中的潜力和可行性。
拉曼散射光谱广泛用于鉴别物质分子结构、确定物质分子组成等研究。但是,拉曼散射光非常弱,所以放大拉曼散射光谱信号就变成了提高拉曼光谱检测性能的主要手段。SERS是一种表面敏感技术,本质是通过贵金属纳米结构基底提供的电磁和化学增强来提高拉曼散射。SERS是利用金属表面等离子共振(SPR)或局域表面等离子共振(LSPR)效应,使其在不同频率激发光下产生不同共振频率,促使吸附在粗糙贵金属表面或附近的物质分子与光子加大能量交换,增大分子散射面积从而增大其拉曼光谱强度。SERS的增强机制包括电磁增强和化学增强。

溶胶基底。这是获得增强拉曼信号的最直接方法,使用时只需要将溶胶基底与目标分析混合均匀即可。但在溶剂型体系中,由于目标分子与金属纳米颗粒的分布随机性较大,难以实现对目标分析物的准确定位。再加上SERS溶胶基底的“咖啡环”效应,使得溶胶基底产生SERS信号的重复性相对较差。
硬质基底。如构筑更加均匀的贵金属纳米结构材料,以及天然的具有纳米结构的材料,可以更加准确地控制热点的发展和目标分析物的定位,从而表现出较好的信号再现性和增强性。但大多数硬质基底不能够循环使用,清洗再利用的过程造成成本过高,使得进一步检测的效果变差。
柔性基底。由柔性材料,包括纸张、对苯二甲酸乙二醇酯(PET)薄膜、聚合物和透明胶带等制备,以纸基基底为代表。环保且价格低廉;柔软可任意折叠和揉搓,使其能够与分析物充分接触;重量轻,携带方便,并且很容易地分成不同形状和大小,以适应特定应用场合;促进金属纳米颗粒的均匀分布和 “热点”的形成,提高检测效率。该基底面临再现性和量化性能等挑战,而微流控方法与纸质基底的结合显著降低了试验操作误差。
在构建SERS霉菌毒素生物传感器过程中,使用与霉菌毒素分子具有特异性识别结合能力的识别单元分子化合物有助于提高SERS传感器的检测限和选择性。
抗体也称为免疫球蛋白,常用于免疫传感平台,基于抗原和抗体相互作用的SERS免疫测定提高了SERS的选择性和敏感性。在SERS传感系统中,抗体作为捕获探针,精确地捕获靶分子,以促进SERS光谱的精确获得。近年来相关研究使用抗体技术作为捕获单元实现霉菌毒素的SERS检测。
适配体是一类能和细胞、病毒、蛋白质和小分子化合物等靶标特异性结合的寡核苷酸序列,被认为是抗体的替代物。与抗体免疫分析相比,适配体具有以下优点: (1)适配体的化学合成过程具有高度可复制性,不易发生突变和结构扰动现象; (2) 对适配体进行化学修饰更加容易;(3) 适配体的热稳定性通常高于抗体; (4) 适配体的非特异性吸附现象比蛋白界面要弱; (5) 适配体的体外筛选不需要动物体内免疫诱导抗体,使得免疫系统不可能获得的非免疫原性和毒性靶标制备适配体成为可能。
分子印迹技术模拟酶与底物或抗体与抗原之间的相互作用,通过特定的分子模板选择性识别目标分子。分子印迹技术不仅可以将目标分子与干扰物分子分开,提高SERS选择性,还可以将目标分子聚集在检测表面,提高灵敏度。基于分子印迹技术的sers传感器在恶劣的化学和物理条件下具有优异的准确性和稳定性,易于操作,具有高度特异性的分子识别能力,已成为生物传感器的一种有前景的替代品。
近年来,横向流动免疫分析法(LFIA)作为最常用的医疗检测方法之一引起了广泛的关注,市售的LFIA试纸条结构简单、成本低、检测时间短、用户友好、可用于不同样品灵活分析。因此,将SERS技术与LFIA技术相结合,为现场多重真菌毒素的高灵敏度检测提供新的思路。该方法的主要优点是可以用肉眼完成定性测试,特别适合于现场和快速监测,对于在线监测有着重要的意义,在资源有限地区作为现场诊断工具具有巨大潜力。除了实现单一霉菌毒素的检测外,研究者还尝试在试纸检测区域设计多条检测线,通过颜色变化实现多种霉菌毒素检测。随着技术不断融合,横向流动试纸条上的同一条检测线上可以同时检测多种霉菌毒素。
利用SERS生物传感技术获取的直接光谱信息通常受到基线偏差、荧光、噪声、光谱重叠、复杂基质、相似结构的影响,这些影响通常难以用肉眼分辨出来,使得SERS技术用于霉菌毒素检测时更具挑战性。化学计量学和机器学习使用多元统计方法从高维数据中提取化学信息,可以帮助多组分含量测定、校正模型、多元分析、特征提取、模式识别、仪器信号处理等。由于可以观察样品光谱的微小差异或检测痕量污染物,其灵敏度和样品处理程序经常受到研究人员的广泛关注。与仅使用一种分析技术生成的模型相比,使用几种或不同技术(数据融合)集成大型数据集与机器学习相结合可以提供更健壮和准确的模型。
大量研究证明了SERS技术在检测各种食品和饲料中霉菌毒素具有巨大潜力,一些瓶颈问题也亟待解决。复杂的SERS基底操作要求高且昂贵,使其在霉菌毒素中的检测应用受到限制;大部分方法都没有达到开发或验证所需的水平,无法作为常规分析的筛选试验手段。为了改善目前SERS传感技术在霉菌毒素中研究的现状,建议在开发和验证SERS方法时在以下3个方面进一步研究和展望:
结合霉菌毒素作用机制进行大量试验实现多目标多组分同时测定,依据化学结构对不同种类霉菌毒素污染物的光谱进行收集并建立相应数据库,为食品安全指标的系统化检测提供依据,与农作物溯源系统实现柔性对接;
结合纳米结构合成技术,发展稳定性好,增强性强,更适合于现场使用的贵金属纳米结构;同时开展微流控系统的研究,将样品预处理和检测集成到芯片中,SERS耦合微流控系统为真菌毒素的原位高精度检测提供了一种很有前景的方法;
提高SERS商业化现场测试仪器和实际应用。

作者简介:
张燕燕,河南农业大学机电工程学院副教授,博士,硕士生导师,主要从事光学生物传感器技术在农业工程领域的研究。主持或参与多项省部级以上科研项目,获河南省科技进步奖二等奖1项,发表学术论文30余篇,第一发明人获得发明专利授权5项。。

通信作者:
胡建东,河南农业大学机电工程学院二级教授,博士生导师,主要从事光电检测技术研究,先后主持有国家自然科学基金项目、国家科技攻关计划项目、国家重点支撑计划课题、国家863计划重点项目子课题、948计划项目、河南省杰出青年基金、河南省国内合作项目、河南省教育厅创新型人才和郑州市领军人才等项目。获河南省科技进步二等奖 2 项,发表了80多篇高质量的论文,具有较强的生物光子学、农业信息学和农业生物物理学的交叉学科知识。
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