该综述首先系统梳理了蛋白质设计方法的发展脉络。从早期依赖实验确定结构和生化知识的理性设计,到整合计算建模与高通量实验的半理性设计,再到以AlphaFold、RoseTTAFold为代表的AI结构预测工具和以ProteinMPNN、ESM为代表的生成式序列模型的兴起,蛋白质设计的效率、可扩展性和预测性能不断提升。展望未来,基于扩散模型的从头设计(如RFdiffusion和Chroma)正在开拓无需依赖天然模板即可生成全新蛋白质架构的能力,有望极大拓展可实现功能的范围。八大代表性应用场景
文章围绕植物生理学和育种的核心需求,深入探讨了蛋白质工程在以下八个方向的应用进展:
(1)增强抗病性:通过工程化改造免疫受体(如NLR蛋白),拓展效应蛋白识别谱、调控免疫信号激活阈值,并利用靶向凝聚体降解系统清除免疫抑制因子,从多个层面提升植物病害抗性。
(2)强化抗虫性:优化Bt毒蛋白关键区域、开发抗体样支架蛋白和天然肽类改造等策略,拓展杀虫分子的多样性和作用模式,应对害虫抗性进化。
(3)提升非生物胁迫抗性:通过受体重编程、代谢酶稳定性工程和氧化还原平衡优化,增强作物在干旱、高温、盐碱和低温等胁迫条件下的适应能力。
(4)提高养分利用效率与品质:围绕碳、氮、磷等关键营养元素,通过改造Rubisco、引入碳浓缩机制、优化固氮酶组分和磷酸盐转运蛋白等策略提升资源利用效率,同时通过代谢工程改善作物营养品质。
(5)变异挖掘与性状精调:利用突变效应预测工具(如DeepDDG、PPVED、SaProt等)和结构预测模型,富集温和的功能调节型变体,结合碱基编辑实现对酶活性、转录因子结合特异性等的精准微调。
(6)优化基因编辑组件:通过工程化改造Cas核酸酶提高切割保真度和靶向范围,优化碱基编辑器和先导编辑器的精度与效率,发展PAM灵活型变体和化学诱导型编辑系统,为精准育种提供更强大的工具。
(7)编程环境感知系统:开发蛋白质生物传感器(如AuxSen、PAleon)实现对植物内源信号的高时空分辨率监测,并通过受体重编程和传感-效应一体化模块拓展可检测输入和可编程响应的范围。
(8)赋能合成环境与植物工厂:在可控环境农业中,利用光遗传学系统、模块化表达系统和合成调控回路,实现性状表达的精准时空调控,为智能化设施农业提供分子基础。