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中国农业科学|江苏省农业科学院兽医所联合西藏农牧大学制备猪轮状病毒VP4单克隆抗体并鉴定抗原表位

  • 2026-02-13 11:42:23
中国农业科学|江苏省农业科学院兽医所联合西藏农牧大学制备猪轮状病毒VP4单克隆抗体并鉴定抗原表位

猪轮状病毒（porcine rotavirus, PoRV）对养猪业危害大。该病毒通过粪口途径传播，感染会导致成熟的小肠肠上皮细胞被破坏，特征是肠绒毛缩短，微绒毛稀疏且不规则。近年来，我国PoRV的检出率呈上升趋势，阳性流行率高达50%以上，且常与其他病原病继发感染，致使仔猪死亡率进一步上升。在 PoRV众多基因型中，P[23]、P[13]、P[7]等为猪群优势流行基因型。不同基因型的病毒在感染特性、致病力等方面存在差异，给防控带来极大挑战。由于目前缺乏有效防控手段，且其感染与致病机制未完全明晰，深入研究PoRV，尤其是针对优势流行基因型的研究刻不容缓。

近期，江苏省农业科学院兽医研究所联合西藏农牧大学动物科学学院完成的题为“猪轮状病毒VP4单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定”的研究在《中国农业科学》2026年第59卷1期正式发表。

该研究以纯化的VP4*P23重组蛋白免疫BALB/c小鼠，运用脾细胞融合技术筛选杂交瘤细胞株，通过Western blot、间接免疫荧光（IFA）、免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）鉴定单克隆抗体反应性，采用间接ELISA评估单抗对构象的敏感性。最后构建VP5蛋白的不同截短体鉴定靶向的抗原表位区域，通过体外中和实验评估VP5单抗的中和能力。

结果显示，成功获得26株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株，抗体亚型包括IgG1、IgG2a、IgG2b和IgM等多种亚型，其中轻链类型以κ链为主。在获得的26株单抗中，有15株被证实能够与天然的PoRV病毒粒子发生特异性反应（通过IFA和IPMA检测）。

SDS-PAGE分析单克隆抗体纯化效果

间接ELISA检测显示，mAb11、14、15、23 为构象不敏感型单抗，mAb16、17、18、19、21、24、25、26为构象敏感型单抗，值得注意的是，mAb1、2、22这3株单抗在抗原变性后反应性反而增强。Western blot分析进一步聚焦于识别线性表位的单抗（mAb11, 14, 15），结果显示它们均能特异性识别VP5蛋白上约300—360位氨基酸区域内的线性表位，可能针对同一抗原表位。然而，体外中和试验评估表明这3株单抗对PoRV毒株无中和作用。
综上，该研究成功制备多株靶向PoRV VP4蛋白的单克隆抗体，并鉴定了它们与天然病毒结合的能力。通过系统的表征，不仅明确了单抗的亚型分布和轻链类型，更重要的是对单抗的抗原识别特性进行了深入解析：成功区分了构象敏感型与构象不敏感型单抗，并精确定位了mAb11、14、15识别的线性抗原表位区域。研究成果为PoRV 诊断试剂优化、亚单位疫苗研发提供了关键抗体资源，为深入研究VP4蛋白的免疫学功能及抗病毒机制奠定了基础。
江苏省农业科学院兽医研究所张雪寒研究员和西藏农牧大学动物科学学院董海龙教授为该文共同通讯作者，赵佳莉为第一作者。

该研究获得国家重点研发计划（2023YFD1800502）、江苏省自主创新资金项目（CX(23)1029）、国家自然科学基金（32573401）资助。

全文链接：
《猪轮状病毒VP4单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定》

赵佳莉, 卞贤宇, 宋家鹏, 王晨, 汤学超, 李运川, 周金柱, 朱雪蛟, 陶然, 董海龙, 张雪寒, 李彬. 猪轮状病毒VP4单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定[J]. 中国农业科学, 2026, 59(1): 220-232.

ZHAO JiaLi, BIAN XianYu, SONG JiaPeng, WANG Chen, TANG XueChao, LI YunChuan, ZHOU JinZhu, ZHU XueJiao, TAO Ran, DONG HaiLong, ZHANG XueHan, LI Bin. Preparation of Monoclonal Antibody to Porcine Rotavirus VP4 and Preliminary Characterization of Antigenic Epitope[J]. Scientia Agricultura Sinica, 2026, 59(1): 220-232.

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《中国农业科学》是中华人民共和国农业农村部主管，中国农业科学院与中国农学会共同主办的以农业为核心的多学科综合性学术期刊。是中文核心、科技核心、CSCD Q1区期刊，是科协支持的卓越期刊。在多家第三方评价系统中，评价总分多年保持在农业综合类期刊中的首位。现为半月刊，设有“作物遗传育种•种质资源•分子遗传学；耕作栽培•生理生化•农业信息技术；植物保护；土壤肥料•节水灌溉•农业生态环境；园艺；食品科学与工程；畜牧•兽医”等栏目。

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